4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液（DTT）使用說明書

【包裝規格】

【保存條件】

建議分裝凍存，避免反復凍融，-20℃，有效期1年

【概述】

4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解，并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感，優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋，消除了各種蛋白質本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質結構，消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關。

上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料：藍色（溴酚藍），用于跟蹤電泳的進度；粉紅色（pyronin Y），用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。

【使用建議】

1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。

2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。

3. 混勻后，100℃水浴加熱5-10分鐘，使蛋白變性。

4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm離心2-5分鐘，取上清直接上樣電泳即可。

【注意事項】

1.     DTT對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

2.     為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3.     聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右， 膠濃度為12%時，約在20kd左右，膠濃度為15%時，大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。

4.     蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑，PH值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態下，溶液可能會呈現深棕色，不影響產品使用。

5.     一般而言，吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠（例如15%）中，吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。