產(chǎn)品細節(jié)圖:

多糖多酚植物總RNA提取試劑盒

品牌：genefist | 貨號：GF441

所屬大類 : 試劑

所屬小類 : 常用生化試劑

品牌 : genefist

規(guī)格 : 50次

原價 : ￥1184.00

促銷價 : ￥1184.00

儲存條件

“裂解液RS” 和 “DNase I”，儲存于-20℃；其他試劑室溫（15-25℃）保存。

產(chǎn)品簡介

本試劑盒所含“裂解液 RS”，采用我司獨特的“SDS/抗氧化”的方式，可適用于廣泛的植物組織，包含草本植物與本本植物的葉片、具高粘性的多糖多酚類及種子胚乳的植物樣本；此提取方案，增加了額外步驟去除多酚和多糖，RNA 的提取總量更高。提取的總 RNA 純度高，基本沒有基因組、蛋白和其它雜質(zhì)的污染，可用于 PCR、Blot、分子克隆等多種下游實驗。

預防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面

1.經(jīng)常更換新手套，因為皮膚帶有細菌，可能導致RNase污染;使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

2.RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水清洗再滅菌，即可去除RNase。

3.配制溶液應(yīng)使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。

使用前注意事項

1.裂解液 RS：使用前請于 50℃水浴將裂解液完全回溶，并添加 450ul 巰基乙醇；添加過巰基乙醇的裂解液 RS 繼續(xù)保存于-20℃（建議將添加過巰基乙醇的裂解液 RS 于無酶管分裝成小量，再保存于-20℃）。

2.溶液 BC：使用前請?zhí)砑?30ml 無水乙醇。

3.漂洗液 PW：使用前請?zhí)砑?64ml 無水乙醇。

4.為確保 RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應(yīng)盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在 RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。

5.鳳梨和蘭花推薦采用“裂解液 RL”（kit 產(chǎn)品目錄 TR02）

操作步驟

1.勻漿處理：50-100 mg 植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl 裂解液 RS（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），立即渦旋劇烈震蕩混勻，并于 56℃孵育 5-10 分鐘，每隔一段時間可翻轉(zhuǎn)混合離心管。

注意：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的 RNA 含量都不相同，請根據(jù)具體實驗情況選擇合適的植物材料的用量。

2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000rpm(~13,400×g)離心 5 min。

注意：溶液會呈現(xiàn)霧狀，為界面活性劑、蛋白質(zhì)、多糖及二次代謝物的沉淀物。

3.移取上清液至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min。

4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。

5.向溶液中加入 1.5 倍體積的溶液 BC（已添加無水乙醇）,以震蕩或移液器吸吐混合均勻。

注意：加入溶液 BC 后會形成絲狀沉淀物，不影響 RNA 提取。

6.移取混合液（連同沉淀物一起）至吸附柱 CR1（吸附柱 CR1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g) 離心1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。

注意：如果混合液體積大于吸附柱容量，可以分次完成。

7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。

8.DNase Ⅰ降解。

每一純化反應(yīng)，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育 15 分鐘。

注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。

9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1 放回收集管中。

10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。

11.重復操作步驟 10。

12.12,000rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附柱中殘余的乙醇。

注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。

13.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。

注意：洗脫液體積不應(yīng)少于 30μl，體積過小影響回收效率。為了增加產(chǎn)量，可將步驟 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1，放置2min，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。

附錄：從高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的樣本中提取 RNA

樟科植物樣本，在裂解后粘稠度高、移取困難，可直接于過濾柱中進行裂解，以減少移液器吸取的步驟。

1.將過濾柱 CS1 于冰上預冷，秤取不超過 30mg 的樣本組織，于液氮中迅速研磨，并將研磨的樣本直接轉(zhuǎn)移至預冷的過濾柱 CS1 里（過濾柱 CS1 放在收集管中）。

2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巰基乙醇)至過濾柱，于 60℃金屬浴孵育 10 分鐘。

3.12,000 rpm(~13,400×g)離心 5 min，將收集管中的濾液移取至新的 1.5ml 離心管，請避免吸取到沉淀物。

注意：有些樣本可能會堵塞過濾柱，可再次離心，或?qū)⒐苤惺Ｓ嗟牧呀庖阂浦列碌倪^濾柱 CS1 再次離心。

4.加入 1/3 倍體積的溶液 GP 至濾液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g)離心離心 5min，將上清液小心轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管，不要觸碰或移取固體沉淀。轉(zhuǎn)至上面“操作步驟 5”。

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暫時沒有說明書

1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337

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多糖多酚植物總RNA提取試劑盒

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