Western高效封閉液

u 產品簡介

在常規的Western blot和ELISA實驗中，需要用封閉試劑將膜或酶標板孔中的未被抗原或抗體占據的位點進行封閉，通常的封閉試劑有BSA，脫脂奶粉等，但是BSA中有少量的抗體殘留，導致抗原/抗體之間的交叉反應，從而產生高背景，雜帶多，或本底水平增高等影響。同樣脫脂奶粉中含有少量的生物素和堿性磷酸酶殘留，在使用生物素-親和素系統和堿性磷酸酶標記的二抗時，也會使得背景高或本底水平增高，脫脂奶粉中含有的酪蛋白和堿性磷酸酶殘留也使得其不適用于磷酸化蛋白的檢測。

本產品采用化學合成的高分子聚合物作為核心封閉試劑，能夠避免BSA、脫脂奶粉等動物源性蛋白作為封閉試劑的缺陷，提高實驗結果的精確性，增加條帶清晰度；本封閉液不會干擾辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)標記二抗的檢測，同時也不影響基于生物素的檢測；本封閉劑不與蛋白產生非特異性結合，只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點，提高了抗體檢測靈敏度。封閉時間僅需十分鐘，大大縮短了實驗過程，節省了寶貴實驗時間。

u 產品特色：

? 即用型封閉液，可直接使用，4℃保質兩年；

? 封閉時間短，僅需10分鐘；

? 減少高背景和非特異性免疫反應，增強條帶清晰度；

? 適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統；

? 不含磷酸鹽、疊氮鈉或硫柳汞類有毒防腐劑。

u 運輸和保存條件：

常溫運輸，4℃存儲，有效期兩年。

u 操作步驟：

1、 完成轉膜后，將膜移入到平皿或者其他適合的容器中。

2、 根據膜的大小，在平皿或者其它適當容器中倒入一定體積的封閉液，確保封閉液能充分覆蓋膜即可。

3、 置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育10分鐘左右。

4、 封閉后的膜即可用于一抗孵育等后續Western Blot實驗。

u 注意事項

? 通常用于PVDF膜或NC膜的封閉時間為10分鐘。對于背景低的抗體，可以縮短到5分鐘，而對于一些背景非常高的抗體，可以嘗試將封閉時間延長為30-60分鐘。

? 信號弱或無信號：可能是上樣量不足，轉膜效率低，抗體效價低、特異性差等原因造成；背景過高：可能是抗體使用量過多，試劑或儀器設備被污染等原因造成。

? 由于沒有任何一種封閉液是適用于所有實驗體系的，因此對于一些特殊的實驗或抗體，請根據抗體說明書及實驗具體情況，選用合適類型的封閉液。

? 本產品不含疊氮鈉、硫柳汞類防腐劑，但含安全性更高的醫療類防腐劑，使用時還需小心操作避免皮膚直接接觸。